密理博/Millirore INYC00010 尼龙膜

millipore正电荷尼龙膜0.45um孔径INYC00010 30cm*3m
 

Northern 和 Southern Blotting，以及 Colony 和 Plaque Lifts

Millipore 提供了一种用于核酸应用转印膜选择。 使用带正电的 Immobilon-Ny+ 转印膜可以在 Southern blotting、Northern blotting 和 colony/plaque lifts 实验中获得出色的结果。 Immobilon-NC 转印膜，是主要的 Southern 和 colony/plaque 实验方案中最初使用的膜，也可作为一种灵敏度较低但更经济的选择。

 

说明: Immobilon-Ny+ 带正电尼龙卷膜，0.45 µm，30 cm x 3 m

商标名: Immobilon

数量/包装: 1

应用: Southern blotting、Northern blotting、菌落/噬菌转印、Dot/Slot blotting 和 DNA 分析

滤膜孔径，µm: 0.45

相容的染料: Non-applicable

可润湿性: 亲水

主要吸附机制: 离子，紫外线固定后为共价的

滤膜尺寸，cm x cm: 30 x 300

替代物: INCP 000 10（核酸应用）

滤膜代码: INYC

滤膜颜色: 白色

产品名称: Immobilon-Ny+ Transfer Membrane

滤膜表面: 光面
 

Immobilon-Ny+ 带正电尼龙转印膜

Immobilon-Ny+ 是一种带正电的尼龙转印膜，非常适合于可靠与可重现的转移、固定、杂交及随后的重复杂交实验。 其表面均一分布的正电荷密度确保得到最高的灵敏度和最低的背景信号。 此膜经强化处理具有超长的耐久性，这一点对于重复杂交试验至关重要。

可提供详细的实验方案，在使用 Immobilon-Ny+ 转印膜时可用于优化转印结果。


 

• 灵敏度最高，而背景信号最小
   
• 非常出色的重复杂交特性
   
• 在化学发光法和放射性检测系统中均表现出色

 

性能

Southern Blotting

直接比较三种带正电尼龙膜在各自优化实验方案下的表现：每种膜在其推荐的紫外波长照射下交联。 Immobilon-Ny+ 转印膜的杂交信号是其它两种膜的 2 倍。

12 次重复杂交之后的信号强度

尼龙膜在 254 nm 交联，并进行了多次重复杂交，依次为：用 ³²P 标记探针做 2 次杂交，4 次模拟杂交，用 ³²P 标记探针做第 7 次杂交，然后进行 5 次模拟杂交以及用 ³²P 标记探针做第 13 次杂交。 在每个杂交周期之间，将膜置于 0.4M NaOH 溶液中，在 45°C 下洗提 30 分钟。 模拟杂交与真实杂交完全一样，区别在于未加 ³²P 标记探针。 在整个重复杂交过程中， Immobilon-Ny+ 的信号强度是竞争产品 A 和 B 的两倍。

检测灵敏度

将凝胶上 DNA 的量减少到 0.01 ng。 0.1 lane（条带）中的 2.2 和 2.0 kbp 带分别与 DNA 的 0.48 和 0.42 pg 相对应。 大约相当于 10 µg 人类基因组 DNA 中一个单拷贝基因序列。 可通过对探针浓度加倍来提高灵敏度。 在 0.01 ng 条带中，与竞争产品 A 相比，Immobilon-Ny+ 转印膜灵敏度稍高，而背景信号更低。

用化学发光检测进行 Northern Blotting

鼠肝的全部 RNA （1 µg） 在甲醛琼脂糖凝胶中电泳分离，然后通过毛细作用转印到 Immobilon-Ny+ 转印膜和竞争产品带正电尼龙膜 “A”。 与烘焙相比，通过紫外交联固定RNA 能增强信号。 Immobilon-Ny+ 转印膜比竞争产品 A 表现出更高的灵敏度。

Colony Lifts

将载有 pUC19 或 pLH2（2.0  kbp λ 噬菌体 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19）的 JM109 混合细菌悬浮液置于琼脂培养皿中，在 37°C 下培养过夜。 将培养皿在 4°C 下冷却30 分钟，将菌落（直径大约 1–2 mm）转印至一片 82 mm 直径的 Immobilon-Ny+ 圆片膜上，或转印至竞争产品带正电的尼龙膜上。 膜上的 DNA 在254 nm， 60,000 µJoules/cm² 紫外光照射下  交联。 然后用 a ³²P 标记的 DNA 探针对膜进行杂交，并使用磷屏成像系统显色。